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    βG及其前体药自杀基因系统对人肾癌细 马兜铃酸所致肾损害中DNA损伤机制的实 罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作 静脉补铁对肾病大鼠氧化应激的影响及抗 阿霉素肾病大鼠霉酚酸酯干预作用研究 褐藻多糖硫酸酯对阿霉素肾病肾硬化大鼠 氯沙坦联合辛伐他汀对大鼠肾间质纤维化 JSB 他克莫司对肾脏缺血再灌注损伤的保护作 小分子多肽化合物CMS010.26对大鼠主动 中华眼镜蛇毒对肾缺血/再灌注损伤保护 霉酚酸酯对实验性大鼠新月体肾炎保护作 CTGF在人近端肾小管上皮细胞上皮—间充 维甲酸对大鼠肾间质纤维化保护作用的研 缺氧预处理对缺氧复氧诱导的肾小管上皮 雌激素对实验性肾间质纤维化大鼠的作用 研究目的:终末期肾病尤其血液透析患者心血管并发症发病率和死亡率远高于普通人群,大量研究证实,此类患者普遍存在的炎症、氧化应激、内皮功能紊乱是导致加速发展的动脉粥样硬化性心血管病的主要原因。目前研究主要针对特定尿毒症毒素造成组织细胞损伤的机制,尿毒症环境对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤情况尚不明确。左旋肉毒碱在血透患者应用较广泛,研究证实它有抗氧化作用,因此对尿毒症环境引起的内皮细胞损伤可能有保护作用。本实验采用终末期肾病血液透析患者血清在体外构建尿毒症环境,观察尿毒症环境诱导的HUVEC形态、活力、一氧化氮释放、丙二醛含量、活性氧、白介素-6变化及左旋肉毒碱干预对它们的影响。探讨尿毒症环境引起的HUVEC功能障碍机制及左旋肉毒碱的保护作用。研究方法:1.体外尿毒症环境的构建:选取病情稳定,透析充分,无感染、损伤、严重并发症、近两周未使用铁剂及抗氧化剂的血液透析患者15例,随机每3例为一组混合血清为5组,用0.22μ的滤膜过滤除菌后配制成各浓度M199尿毒症血清培养液。以同期体检中心健康人血清构建健康人内环境。两组性别、年龄无统计学差异。2.细胞培养与分组以体外培养的HUVEC为研究对象。(1)观察尿毒症环境对HUVEC的损伤机制:将细胞分为正常对照组(N组:含1%超级新生牛血清)、尿毒症组(U组:分别含2.5%、5%、10%、15%的血透患者血清)、健康对照组(H组:分别含2.5%、5%、10%、15%的健康人血清)。(2)观察左旋肉毒碱对HUVEC功能障碍和炎症反应的保护作用:将细胞分为正常对照组(N组:含1%超级新生牛血清)、尿毒症组(U组:含5%血透患者血清)、左旋肉毒碱干预组(LC组:分别含不同浓度L-CN:25μM,250μM,1000μM,2500μM)。3.方法:(1)相差显微镜下观察HUVEC形态改变。(2)MTT法测细胞活力。(3)比色法检测细胞上清液一氧化氮含量及胞浆丙二醛含量。(4)以2、7-二氢二氯荧光素染色(DCFH)和荧光分光光度计法检测ROS强度。(5)RT-PCR和ELISA方法检测IL-6表达。研究结果:1.相差显微镜下,尿毒症环境内的HUVEC细胞出现损伤性表现,细胞内分泌物增多,细胞间隙增宽,高浓度尿毒症环境可引起细胞脱落坏死。2.MTT结果显示:各浓度组尿毒症环境中HUVEC活力明显低于同浓度健康人;相对于同浓度健康人尿毒症环境中内皮细胞相对生长抑制率呈浓度依赖性增加;高浓度(2500μM)左旋肉毒碱干预后可改善细胞活力。3.5%~10%尿毒症环境中HUVEC细胞上清液NO含量呈浓度依赖性下降,胞浆MDA呈浓度依赖性上升;与健康人对比NO的减少及MDA的增加均有统计学意义;左旋肉毒碱(250μM~2500μM)干预可缓解尿毒症环境引起的NO和MDA改变。4.尿毒症环境能使细胞内ROS产生及IL-6表达浓度依赖性增加;且与健康人对照差异显著;而L-CN(250μM~2500μM)可明显抑制尿毒症环境中细胞内ROS产生及IL-6表达,且有浓度依赖效应。结论:尿毒症血清导致血管内皮细胞功能障碍,促使血管内皮微炎症状态的建立,L-CN可抑制其组织活性氧及白介素-6的产生,减轻尿毒症患者慢性炎症反应,改善内皮细胞功能,对血管粥样硬化病变可能有延缓作用。

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